?
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
人波形蛋白（VIM）elisa試劑盒Anti-MS4A2研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 細胞粘附分子 細胞分化 細胞骨架

雞HSP72抗體（IgG）elisa試劑盒Anti-MYL3/Myosin light chain 3研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 細胞骨架

鯨孕激素/孕酮（PROG）elisa試劑盒Anti-Mesothelioma研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 結(jié)合蛋白 細胞骨架

DMEM高糖價格Anti-MSS1研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導 生長因子和激素 新陳代謝 表觀遺傳學

BOC-D-脯氨酸價格Anti-MATR3/Matrin 3研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導

CG-50離子交換樹脂價格Anti-Mitochondrial ribosomal protein L11研究領(lǐng)域  免疫學 神經(jīng)生物學 趨化因子 t-淋巴細胞

高范圍RNA Ladder實驗步驟Anti-Myocardin研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學

桿菌肽實驗步驟Anti-MIS12研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 信號轉(zhuǎn)導 新陳代謝

硫酸〖鋅〗價格Anti-MMP9研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 染色質(zhì)和核信號

甲基紅實驗步驟Anti-MDH1研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 細胞凋亡 趨化因子 泛素

蜂王漿使用說明書Anti-MDR1/p-GP/CD243 (N-terminus)研究領(lǐng)域  染色質(zhì)和核信號 細胞周期蛋白 表觀遺傳學

M13 噬菌體單鏈基因組 DNAout50 次說明書Anti-MT-ND1研究領(lǐng)域

中提柱式 BAC DNAout5次多少錢Anti-MUL1/RNF218研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導 通道蛋白 新陳代謝

海藻糖溶液，1.5M，PCR 級1.5mL哪里有賣Anti-Mast Cell Chymase/CHYMASE研究領(lǐng)域  細胞生物 免疫學 神經(jīng)生物學 通道蛋白

鸚鵡熱衣原體PCR檢測試劑盒保存Anti-MAGP2研究領(lǐng)域

黃芩苷OPN  骨橋蛋白（多肽抗原） 磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體IgG

野黃芩苷（燈盞花乙素）BAFF/CD257(B cell activating factor)  TNF家族B細胞激活因子抗原 兔抗人、大、小鼠磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體IgG

黃芩素P53  腫瘤抑制基因（抗原） 兔抗人、大、小鼠磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體IgG

秦皮素PACAP-27/38  腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38（抗原） 兔抗人、大、小鼠磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體IgG

秦皮甲素PACAP-38  腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38（抗原） 磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體IgG

秦皮乙素Bid (BH3 interacting domain death agonist)  BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白抗原 FITC標記磷酸化巨噬細胞集落刺激因子受體IgG

標準品PACAP(6-38 Peptide)  腺苷酸環(huán)化酶激活肽6-38抗體

綠原酸PACAP/VIP receptor  腺苷酸環(huán)化酶激活肽/血管活性腸肽受體（抗原） piwi樣2蛋白IgG

新綠原酸（5-咖啡?？鼘幩幔㏄ACAP receptor-I  腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體（抗原） 抗生長、分化因子1IgG

隱綠原酸（4-咖啡?？鼘幩幔㏄ADI4 (HL-60 PAD)(Protein-arginine deiminase type IV，PADI 4，PAD I4 )  關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因 肌細胞生長抑制素IgG
牛眼莫拉氏菌PCR檢測試劑盒廠家大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT個

大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

大鼠血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

大鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克